蛋白質(zhì)的鑒定與分析
從復(fù)雜混合物中純化目標(biāo)蛋白的方法很多，但制備層析純化最常用。層析類(lèi)型的選用取決于目標(biāo)蛋白的理化特性。依據(jù)制備或定量分析，選用快速蛋白液相層析或高效液相層析。還可以選擇下列層析或其組合：疏水作用柱層析，離子交換柱層析、分子棑阻層析及親和層析。 如果僅需少量目標(biāo)蛋白，可采用電泳技術(shù)。已知蛋白分子量，就可在電泳膠的相應(yīng)位置，切割蛋白條帶用于下一步質(zhì)譜分析。通常 SDS-PAGE提供蛋白分子大小信息。如將等電聚焦膠條上樣于SDS-PAGE，則是二維電泳，它提供蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和分子量信息。二維膠條的分辨率比一維膠條大大提高。 假如目標(biāo)蛋白含量太少，可使用特異性抗體進(jìn)行免疫印跡?？贵w還可用于分離純化蛋白。由于抗體結(jié)合的專(zhuān)一性，大多數(shù)最終產(chǎn)品都可以利用目標(biāo)蛋白的抗體加以純化。利用能結(jié)合大多數(shù)抗體分子的蛋白A偶聯(lián)的或蛋白G偶聯(lián)的瓊脂糖凝膠，幾乎所有抗體通過(guò)幾輪離心就得到少量純品。酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)技術(shù) 是利用抗體的靈敏分析方法。無(wú)須純化，ELISA可鑒別并定量目標(biāo)蛋白。 如果抗體足夠，還可通過(guò)免疫組織化學(xué)或免疫熒光標(biāo)記對(duì)機(jī)體組織及細(xì)胞中的目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位及原位含量測(cè)定。 除抗體外，還可使用適配器，即特異性結(jié)合靶蛋白的核酸大分子研究目標(biāo)蛋白?？赏ㄟ^(guò)SELEX，即指數(shù)富集配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)篩選獲得。由于極易化學(xué)合成，適配器將來(lái)會(huì)取代抗體。 近年來(lái)，液質(zhì)聯(lián)用越來(lái)越廣泛用于靶蛋白鑒定，但質(zhì)譜僅局限于定性分析。代謝標(biāo)記在實(shí)驗(yàn)室受控培養(yǎng)條件下可定量。借助痕量靶蛋白的序列信息，代謝標(biāo)記技術(shù)已成為精確可靠的蛋白質(zhì)分析方法。最近，通過(guò)二維樣本的質(zhì)譜數(shù)據(jù)集成像或圖譜成像，質(zhì)譜成像（也稱(chēng)成像質(zhì)譜）已成為直接檢測(cè)組織或細(xì)胞特定區(qū)域蛋白質(zhì)的有效手段。該方法僅憑觀察組織細(xì)胞，就能原位探測(cè)靶蛋白的有無(wú)。也可在復(fù)雜情況下快速準(zhǔn)確地探測(cè)特定生物標(biāo)志物分子的有無(wú)。
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