K562-Tax紫杉醇耐藥性細(xì)胞的培養(yǎng)說(shuō)明

　一、細(xì)胞名稱：K562-Tax紫杉醇耐藥性細(xì)胞

　二、生長(zhǎng)特性：懸浮

　三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：
　　培養(yǎng)基    90%培養(yǎng)基DMEM
　　血清    10%FBS
　　溫度    37℃
　　空氣條件    5%CO2，95%AIR
　　凍存條件    培養(yǎng)基50%、血清40%、DMSO10%
　四、細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
　　1.細(xì)胞收到后建議在培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時(shí)左右再依據(jù)細(xì)胞密度，換液培養(yǎng)或傳代。
　　2.如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞及時(shí)離心，加15%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)2-3天。若3天后細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室，技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決。
　　3.貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（最高不超過(guò)20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
　　4.生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)生長(zhǎng)不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
　五、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）
　　1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3ml0.25%EDTA的胰酶消化（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?~2min）。
　　2.鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁運(yùn)動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?~8ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落、吹散。
　　3.取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時(shí)重復(fù)傳代操作或者凍存。
　　特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
　　1.收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含10%FBS的新鮮培養(yǎng)基，不建議使用原瓶中運(yùn)輸用培養(yǎng)基。
　　2.細(xì)胞任何售后問(wèn)題，均需拍照存檔并及時(shí)聯(lián)系客服。

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