紅細(xì)胞裂解液的配方與作用

細(xì)胞裂解液常用于細(xì)胞上游的操作。最常用的裂解液是RIPA，可用于提取細(xì)胞和組織中的可溶性蛋白（離心后提取上清）。但最近十年來(lái)，關(guān)于裂解液對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響時(shí)有報(bào)道。如RIPA 裂解液可強(qiáng)烈影響IFN 抗原抗體間的結(jié)合，不宜用于ELISA 檢測(cè)IFN 時(shí)細(xì)胞和組織樣本的裂解。

紅細(xì)胞裂解液的使用在動(dòng)物試驗(yàn)中極其頻繁，其與PBS、生理鹽水、細(xì)胞培養(yǎng)基，并稱(chēng)實(shí)驗(yàn)室四大液體耗材。然而紅細(xì)胞裂解液是如何達(dá)到裂解紅細(xì)胞但是又不破壞其他有核細(xì)胞效果的呢。

紅細(xì)胞裂解液的配方

實(shí)驗(yàn)室常用自配紅細(xì)胞裂解液的主要成分為:碳酸氫鉀（1g），氯化銨（8.3g）以及EDTA.2Na（0.037g），最終用KOH和HCl調(diào)節(jié)PH值至7.2-7.4（此配方為配制1000ml紅裂液）。然后消高壓，4℃儲(chǔ)存、備用。

由于EDTA.2Na的用量很小，如果稱(chēng)取0.037g必定會(huì)造成較大的稱(chēng)量誤差，所以我往往會(huì)準(zhǔn)備一瓶EDTA.2Na的儲(chǔ)存液（0.37gEDTA.2Na溶于1000ml ddH2O中，每次配置1000ml紅裂液時(shí)從中吸取100ml儲(chǔ)存液）

紅細(xì)胞裂解液各個(gè)成分在裂解過(guò)程中的作用

氯化銨是紅細(xì)胞裂解液中主要的效應(yīng)物質(zhì)，銨根離子不能透過(guò)細(xì)胞膜，而其他離子可以通過(guò)，這樣就造成細(xì)胞內(nèi)外離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會(huì)擴(kuò)散至胞內(nèi)，使細(xì)胞膨脹。由于紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，因此膨脹的耐受能力較差，絕大部分就會(huì)被漲破。碳酸鹽的主要作用為PH緩沖。EDTA與鎂離子和鈣離子形成的螯合物主要起到破壞細(xì)胞膜穩(wěn)態(tài)的作用，此作用對(duì)白細(xì)胞影響很小，所以這種裂解液可以在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)較小的影響白細(xì)胞。

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