抗體知識

Part.01

眼花繚亂的抗體種屬

抗體的種屬選擇在市面上有很多種，常見有小鼠、大鼠、兔、山羊、驢、羊駝等，其中兔來源已經(jīng)占據(jù)主流，主要歸于它更高的親和力與特異性外，還具有單次獲取量經(jīng)濟的優(yōu)勢。

那么為什么需要這么多的種屬，各自的區(qū)別是什么呢？除了樣本本身的需要外，主要是以下幾個原因。

首先，抗體的產(chǎn)生依賴動物對抗原的強效免疫應(yīng)答。選擇與抗原來源親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的動物，能有效避免“自體識別”，從而激發(fā)更強的免疫反應(yīng)，例如，制備抗人蛋白的抗體，兔子比猴子更常用。

其次在復(fù)雜的實驗中，需要避免不同抗體之間的交叉反應(yīng)。例如，在多重標(biāo)記實驗中，如果樣本本身含有小鼠蛋白，就需要使用兔或山羊來源的一抗，再搭配相應(yīng)的抗兔/抗羊二抗，以避免來自小鼠的抗體相互干擾。

另外，不同動物產(chǎn)生的抗體在結(jié)構(gòu)上具有獨特性。例如，雞的IgY抗體不與哺乳動物的Fc受體結(jié)合，因此在檢測哺乳動物組織樣本時可以有效降低背景信號。

Part.02

單克隆抗體的克隆號

說到選擇抗體，嫻熟的科研人本能反應(yīng)會想到自己的樣本來源、抗體宿主以及應(yīng)用驗證，估計有些朋友壓根都不關(guān)注克隆號，反而一些新手老老實實，逐行閱讀說明書時，碰到這個概念就犯起了糊涂。

抗體克隆號（Clone ID）是單克隆抗體的唯一身份標(biāo)識，相當(dāng)于其“身份證號”，它代表了最初從一個單一B細(xì)胞克隆增殖產(chǎn)生的、分泌完全同質(zhì)抗體的細(xì)胞系。

通常來說，只要克隆號相同，就意味著你使用的抗體來自完全相同的原始細(xì)胞克隆，理論上其氨基酸序列和結(jié)合特性完全一致，特別需要注意的是，不同公司中克隆號相同的抗體免疫原序列是可能不相同。

克隆號的意義在于精準(zhǔn)再現(xiàn)實驗，因為同一靶點可能有多個不同克隆號的單抗。只有克隆號才能唯一確定你用的是哪一個。不同克隆號識別靶蛋白上不同的表位，其特異性、親和力天差地別。若想更加穩(wěn)定準(zhǔn)確，最好是保證克隆號和批次號的一致性。

Part.03

KO/KD 驗證有什么講究

為了盡可能避免非特異性結(jié)合帶來的假陽性判讀，在廠家的說明書里面，部分產(chǎn)品有一欄注明了是否有經(jīng)過KO或KD驗證。

這里的KO和KD是基因敲除/敲低，兩種手段是驗證評估抗體特異性最嚴(yán)謹(jǐn)、最令人信服的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法。具體方式是利用CRISPR-Cas9技術(shù)敲除目標(biāo)基因，確保蛋白完全缺失，繼而反向判定其特異性。

基因敲低是減少某個基因的表達(dá)，并非完全消除，不改變基因的DNA序列，最常通過干擾基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯過程來降低其表達(dá)水平。

它是針對某個序列已知但功能未知的序列，改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏蔽，并可進(jìn)一步對生物體造成影響，進(jìn)而推測出該基因的生物學(xué)功能。